检测条码色彩与荧光染料比率的关系

本文主要探讨用荧光染料染色后的条码色彩与荧光染料比率的关系。

准备样品

• 纳米探针(结合了长链DNA序列的金纳米粒子)与指示探针(用荧光染料修饰的短链DNA子序列)在400pl的杂交缓冲溶液中孵化，以保证均匀结合。
• 杂交过程中，温度为250C，时间为2h，并保持在黑暗中轻轻搅拌。
• 样品用400u1的杂交缓冲溶液来离心洗涤三次，以洗去多余的和微弱结合的纳米条码。取其中一半样品重复步骤1，首先进行定性检测，然后用荧光分光光度计测量杂交之后纳米条码的稳态荧光，荧光光谱仪用罗丹明B标准溶液校正使其信噪比达到最大。
• 对于五种不同荧光比率的杂交纳米条码溶液，分别放入荧光光度计中测量其红绿二色荧光强度。选择固定的激发波长对荧光素溶液进行激发，然后在其发射波长处测定其荧光强度，未加入纳米条码的空白溶液所测得的荧光强度为F。
• 加入杂交纳米条码所得到的荧光强度为F。计算其倍数所用的方法为(F2一F1)/F．荧光增强或者减弱的相对强度为R—FI。

荧光分光光度计表征

我们在条码标记中使用了红绿两色荧光染料AlexaFluor488(绿色)和BODIPY630/650(红色)，其中lexaFluor488的激发波长和发射波长分别为495/519nm，而BoDIPY630/650的激发波长和发射波长分别为630/650nm。由条码的紫外可见发射光谱研究，结果如下图所示，荧光染料的特征吸收峰发生了蓝移，这应该是荧光染料与DNA间有强烈的作用而引起的。

通过分析可以：我们采用荧光分光光度计分别对纳米条码上标记的红绿荧光染料进行荧光强度分析得知，荧光强度与条码浓度具有非常良好的线型关系，与预想的解码分析非常相符，这为纳米条码在实际应用中进一步进行定量分析提供了可靠的理论基础。