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应用荧光分光光度法测定血清及组织中阿霉素含量

 

应用荧光分光光度计测定血清及组织中阿霉素含量,以寻求一种简单、方便、灵敏度高,值得临床推广的新方法。

阿霉素是临床上广泛应用的化疗药物之一,是从Streptomycer peucetisu Var,eaerius的发酵液中提取的一种糖苷抗生素。主要应用于乳腺癌、肺癌、急、慢性白血病等恶性肿瘤的化疗,其抗瘤谱广,对乏氧细胞有效,在肿瘤治疗中占有重要地位。其主要毒副作用为心脏毒性和骨髓抑制。为达到理想的抑瘤作用并减少全身毒副反应,化疗过程中监测血清及组织中的阿霉素浓度则十分重要。已有报道采用高效液相色谱法、放射免疫法等手段来检测血清及组织中阿霉素的含量,但都存在操作复杂、费用高等缺点。本实验拟采用荧光分光光度法来对其进行检测。

仪器型号与试剂

实验仪器:增力电动搅拌机(JB50-D型上海标本模型厂制造),高速冷冻离心机(20PR一52D日本日立公司),赛多利斯微量分析天平(BP211D北京赛多利仪器系统有限公司),荧光分光光度计(RF-540日本岛津公司)。

实验试剂:阿霉素为深圳万乐药业有限公司生产,其余实验所用试剂均为分析纯试剂(市售)。

实验方法

标本曲线制备

取阿霉素标准溶液加抽提液(含0.3ml/LHCI的60%乙醇)至浓度依次为2.7778、5.5556、8.3333、11.1111、13.8889ug/ml,荧光分光光度计在λex/em为470/590nm,狭缝Ex、Em均为lOnm的状态下测定其荧光值,制作标准曲线。以荧光度(x)、阿霉素浓度(F)直线回归,阿霉素浓度与荧光强度具有良好的线性相关,直线方程为F=0.2026Xm.1565,相关系数γ>0.9997(P<0.01)。

血清中阿霉素含量测定

将阿霉素按3g/kg沿家兔(2.5—3.5lkg)耳缘静脉滴人,3h后采外周血,离心取血清1ml,加抽提液1ml,充分混匀,利用荧光分光光度计λex/em为470/590nm,狭缝Ex、Em均为10nm的状态下测定其荧光值,以标准曲线方程计算其相应的阿霉素浓度。

组织中阿霉素含量测定

将阿霉素按3mg/kg沿家兔(2.5—3.5kg)耳缘静脉滴入,3h后分别取心、肝、肾、肺组织100mg加入抽提液(含O.3ml/LHCl的60%乙醇),于4℃充分均浆。12000g离心15min,取上清液用荧光分光光度计在λex/em为470/590nm,狭缝Ex、Em均为10nm的状态下测定其荧光值,制作标准曲线方程计算其相应的阿霉素浓度。

回收率的测定

取空白血清加阿霉素标准溶液配制成3.0、1.5、0.75ug/mL的样本;取心、肝、肾、肺组织均浆加阿霉素标准溶液配制成40、20、10ug/g的样本,计算血清及组织中阿霉素方法回收率。

结果与讨论

阿霉素经静脉注射后可被全身组织迅速摄取,主要分布于心、肝、肾、肺组织中,在肝内代谢。为此,我们应用荧光分光光度计测定了血清及心、肝、肾、肺组织中阿霉素含量,血清及各组织中阿霉素的平均方法回收率分别为100.19%、97.61%、95.76%、96.01%、99.17%。与上述报道的方法相比,我们应用的荧光分光光度法具有较高的检测灵敏度,并且操作简便,费用相对较低,值得临床推广。

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