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荧光分光光度计法测定腊肉中维生素C

 

vc为人体必需的营养成分,在维持血管弹性,减低毛细血管脆性,增加人体的抵抗力方面具有重要作用,可用于坏血病的预防及治疗。由于VC能明显改善肉类品质(如肉的颜色、吸水力等),故饲料中往往添加VC,导致肉及肉制品中常含有低量的VC。

目前,食品中VC测定主要方法有:2,4-二硝基苯肼比色法、紫外分光光度法w、近红外分光光度法电化学法、高效液相色谱法、碘量化等,而用荧光分光光度计法测定肉制品中VC报道较少。滴定法、紫外分光光度法、电化学法等检出限高、操作复杂,时间长,测试条件较为严格。

由于肉类中VC含量一般都较低,故本实验选用荧光分光光度计测定腊肉中VC,实验证明该方法灵敏度高,快速简便,测试条件允许范围较宽,结果令人满意。

仪器与试剂

  • 荧光分光光度计[F-TOOO(日立公司)]
  • DHG-9241A恒温培养箱(上海贺德实验设备有限公司)
  • 抗坏血酸(分析纯,天津市永大化学试剂开发中心)
  • 偏磷酸、乙酸钠(分析纯,国药集团化学试剂有限公司)
  • 硫脲(分析纯,上海精析化工科技有限公司)
  • 硼酸(分析纯,上海申博化工有限公司)
  • 2,6—二氯靛酚、盐酸邻苯二胺(分析纯,中国医药集团上海化学试剂公司)。

实验方法

1、样品前处理

精确称取匀浆后的腊肉2~5g置于烧杯中,加入20mL 50g•L-1偏磷酸,超声20min后,过滤至lOOmL棕色容量瓶中,用50g.L-1偏磷酸定容。吸取滤液l.OOmL于试管中,加入0.10mL 2g•L-1二氯靛酚(使VC氧化成脱氢VC),混勻(此时溶液呈微红色)。再加人0.10mL 30g•L-'硫脲摇匀,使红色褪去(还原过量的二氯靛酚)。向试管中加入1.00mL 3%硼酸一50%乙酸钠,摇匀,室温下静置15min。在暗室中迅速向试管中加入5.00mL 0.2g•L-1盐酸邻苯二胺,摇勻,在室温下反应30min。同时做试剂空白。

2、抗坏血酸标准溶液

准确称取60℃真空干燥2h的0.0500g抗坏血酸,用50g•L-1偏磷酸溶解并定容至50mL棕色容量瓶中,即为lmg•L-1的抗坏血酸标准储备液。

用偏磷酸逐级稀释,配置成0、0.2、1、5、10、20mg.L—1标准溶液,其余步骤同样品前处理。

3、荧光光度计参数条件

测量模式:光度测量法,激发波长350mn,发射波长430mn,积分时间0.1s,延迟时间按0.1s,激发波长狭缝宽度5.0mn,发射波长狭缝宽度5.0mn,光电倍增管电压250V。

结果与讨论

1、方法的检出限、标准曲线和相关系数

连续11次进空白样品,根据3倍标准偏差计算得出本方法VC检出限为0.95mg/kg。回归方程为Y=0.0073X-0.029,相关系数为0.9996。可见本方法检出限较低,在测量浓度0〜20mg-L—1范围内线性良好。

2、样品的测定及回收率

按本方法测定腊肉中VC,同时在待测样品中加人巳知量抗坏血酸标准溶液,按测定步骤进行加标回收实验,结果见表2。方法的回收率在87.2%~94.3%之间,测定结果满足分析要求。

3、荧光分光光度计法与2,4-二硝基苯肼比色法比较

肉类中VC测定常采用传统的2,4-二硝基苯肼比色法,荧光分光光度计法则很少见报道。肉制品中VC含量都很低,2,4-二硝基苯肼法的检出限较高、重复性也较差,而荧光分光光度计法检出限低、精密度较高。故将荧光分光光度计法与2,4-二硝基苯肼比色法对腊肉中VC的测定结果相比较,结果见表3。从表3可知,这两种方法测定腊肉中VC含量,其结果无显著差异,且荧光分光光度计法精密度更好。可见,荧光分光光度计法测定肉制类样品中VC具有快速、准确、精密度高等优点。

结论

实验证明,腊肉中VC用偏磷酸钠提取c,经2,6—二氯靛酚氧化后与邻苯二胺反应,生成具有紫蓝色荧光的衍生物,用荧光分光光度计测定其荧光强度,该方法具有检出限较低,精密度高、快速准确等优点,尤其适合Vc含量低的样品分析测定。

文章标签:荧光分光光度计应用24-二硝基苯肼比色法 评论收藏分享

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