荧光分光光度计法测定腊肉中维生素C

 

vc为人体必需的营养成分，在维持血管弹性，减低毛细血管脆性，增加人体的抵抗力方面具有重要作用，可用于坏血病的预防及治疗。由于VC能明显改善肉类品质（如肉的颜色、吸水力等），故饲料中往往添加VC,导致肉及肉制品中常含有低量的VC。

目前，食品中VC测定主要方法有：2,4-二硝基苯肼比色法、紫外分光光度法w、近红外分光光度法电化学法、高效液相色谱法、碘量化等，而用荧光分光光度计法测定肉制品中VC报道较少。滴定法、紫外分光光度法、电化学法等检出限高、操作复杂，时间长，测试条件较为严格。

由于肉类中VC含量一般都较低，故本实验选用荧光分光光度计测定腊肉中VC,实验证明该方法灵敏度高，快速简便，测试条件允许范围较宽，结果令人满意。

仪器与试剂

• 荧光分光光度计[F-TOOO(日立公司）]
• DHG-9241A恒温培养箱（上海贺德实验设备有限公司）
• 抗坏血酸（分析纯，天津市永大化学试剂开发中心）
• 偏磷酸、乙酸钠（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）
• 硫脲（分析纯，上海精析化工科技有限公司）
• 硼酸（分析纯，上海申博化工有限公司）
• 2,6—二氯靛酚、盐酸邻苯二胺（分析纯，中国医药集团上海化学试剂公司）。

实验方法

1、样品前处理

精确称取匀浆后的腊肉2~5g置于烧杯中，加入20mL 50g•L-1偏磷酸，超声20min后，过滤至lOOmL棕色容量瓶中，用50g.L-1偏磷酸定容。吸取滤液l.OOmL于试管中，加入0.10mL 2g•L-1二氯靛酚（使VC氧化成脱氢VC)，混勻(此时溶液呈微红色）。再加人0.10mL 30g•L-'硫脲摇匀，使红色褪去（还原过量的二氯靛酚）。向试管中加入1.00mL 3%硼酸一50%乙酸钠，摇匀，室温下静置15min。在暗室中迅速向试管中加入5.00mL 0.2g•L-1盐酸邻苯二胺，摇勻，在室温下反应30min。同时做试剂空白。

2、抗坏血酸标准溶液

准确称取60℃真空干燥2h的0.0500g抗坏血酸，用50g•L-1偏磷酸溶解并定容至50mL棕色容量瓶中，即为lmg•L-1的抗坏血酸标准储备液。

用偏磷酸逐级稀释，配置成0、0.2、1、5、10、20mg.L—1标准溶液，其余步骤同样品前处理。

3、荧光光度计参数条件

测量模式：光度测量法，激发波长350mn,发射波长430mn,积分时间0.1s,延迟时间按0.1s,激发波长狭缝宽度5.0mn,发射波长狭缝宽度5.0mn，光电倍增管电压250V。

结果与讨论

1、方法的检出限、标准曲线和相关系数

连续11次进空白样品，根据3倍标准偏差计算得出本方法VC检出限为0.95mg/kg。回归方程为Y=0.0073X-0.029，相关系数为0.9996。可见本方法检出限较低，在测量浓度0〜20mg-L—1范围内线性良好。

2、样品的测定及回收率

按本方法测定腊肉中VC，同时在待测样品中加人巳知量抗坏血酸标准溶液，按测定步骤进行加标回收实验，结果见表2。方法的回收率在87.2%～94.3%之间，测定结果满足分析要求。

3、荧光分光光度计法与2，4-二硝基苯肼比色法比较

肉类中VC测定常采用传统的2，4-二硝基苯肼比色法，荧光分光光度计法则很少见报道。肉制品中VC含量都很低，2,4-二硝基苯肼法的检出限较高、重复性也较差，而荧光分光光度计法检出限低、精密度较高。故将荧光分光光度计法与2，4-二硝基苯肼比色法对腊肉中VC的测定结果相比较，结果见表3。从表3可知，这两种方法测定腊肉中VC含量，其结果无显著差异，且荧光分光光度计法精密度更好。可见，荧光分光光度计法测定肉制类样品中VC具有快速、准确、精密度高等优点。

结论

实验证明，腊肉中VC用偏磷酸钠提取c，经2，6—二氯靛酚氧化后与邻苯二胺反应，生成具有紫蓝色荧光的衍生物，用荧光分光光度计测定其荧光强度，该方法具有检出限较低，精密度高、快速准确等优点，尤其适合Vc含量低的样品分析测定。