荧光分光光度计法测定阿米卡星含量

 

阿米卡星为氨基糖苷类抗生素，具有抗菌作用强等优点，另外阿米卡星对许多肠道革兰阴性杆菌和绿脓杆菌所产生的纯化酶、乙酰转移酶和核苷转移酶等作用稳定，故阿米卡星还在临床上治疗多种耐药菌感染。但阿米卡星与其它氨基糖苷类抗生素一样，具有肾毒性，过高的血药浓度会导致耳、肾毒副作用，并且它对神经肌肉接头有阻滞作用。因此，建立这类药物的定量测定方法十分重要。

目前，阿米卡星测定方法有微生物法、高效液相色谱法、双波长光度法等。由于荧光法具有高灵敏度、操作简单快速的特点，正好适合于药物分析，尤其在药检工作中对药物的快速测定。本文研究了阿米卡星荧光光谱，发现阿米卡星在酸性条件下具有较强的荧光性质，由此建立了直接测定阿米卡星的荧光分析方法。该方法简单、快速、灵敏度高，用于实际试样分析，结果令人满意。

仪器及试剂

• 岛津RF一540型荧光分光光度计(日本岛津公司)；氙灯；荧光分光光度计的激发和发射狭缝宽度均为5nm；Delta320pH计(瑞士梅特勒一托利多公司)。
• 阿米卡星(AMK)(中国药物生物制品检定所)标准溶液：储备液浓度2.0mg·ML-1，操作溶液浓度200mg·ML-1，使用时逐级稀释至所需浓度；0.1mol·L-1 HAc—NaAc缓冲溶液(pH=4.0)；所用试剂均为分析纯，实验用水为二次蒸馏水。

分析方法

在10mL比色管中依次加入一定量的200mg·mL-1 AMK标准溶液，2.0mL的缓冲溶液用二次蒸馏水稀释至刻度，摇匀并静置5min，用1cm石英池，以355nm为激发波长，在405nm处测定荧光强度，同时作试剂空白。

实验部分

1、光谱特征

按实验方法配制溶液后，用荧光分光光度计扫描，以355nm为激发波长，得到阿米卡星的荧光光谱图(图1)。从图1中可以看出，阿米卡星在405nm处荧光强度最大，并且随着阿米卡星浓度的增加，荧光强度也在逐渐增强。

2、介质及酸度的影响

分别试验了HAc—NaAc，PBs，Tris—Hcl，Hcl一柠檬酸钠等缓冲体系对AMK荧光强度的影响，结果表明，使用HAe—NaAc缓冲体系效果最好，所以本实验采用HAc—NaAc缓冲溶液为介质。另外还试验了AMK在不同酸度条件下的荧光发射，发现HAc—NaAc缓冲溶液的pH值在4.0处AMK的荧光强度最大。

3、标准工作曲线与检测限

分别准确的配制浓度为0.1～50mg·mL一的AMK标准溶液，在最佳实验条件下，按2.1的实验方法，分别对不同浓度AMK溶液进行荧光光谱扫描，测得在0.5～20mg·mL-1范围内，AMK浓度与其荧光强度呈良好的线性关系，线性回归方程分别为F=2.1170CAMK+30.9349，相关系数r=O.9998，检出限为0.5mg·ML-1。

4、共存离子的影响

实验了外来离子对阿米卡星含量为10mg·mL一时的影响。结果表明，当相对误差≤±5％时，以下共存离子不干扰测定：Ba2+，M92+，Na+，SO42-(300倍)，NH4+，Mn2+，PO43-，CL-，NO3-(150倍)，葡萄糖、酒石酸(20倍)，C02+，H92+，Cu2+(1倍)。可见，本方法具有良好的选择性。

5、稳定性试验

取新配制的供试品溶液于室温下放置，并于O、1、2、4、6、10h按2.1的方法进行测定，结果AMK的荧光强度的RsD=2.3％。表明供试品溶液在10h内稳定性良好。

6、精密度试验

平行配制5份同一浓度的AMK的标准溶液，按2.1的方法连续测定5次，结果AMK的荧光强度的RSD=1.8％。

7、加样回收率试验

准确配制一定浓度的样品溶液，分别准确加入不同量的标准溶液，在线性范围内配制成高、中、低系列浓度的溶液，测定加样回收率，结果见表l。

8、样品含量测定

分别取已知含量的1支(2mL)硫酸阿米卡星注射液(上海第一生化药业有限公司)和1瓶(10tnL)外用阿米卡星溶液(成都制药四厂)适量，按各自的标示量稀释成10mg·mL-1的溶液，然后按2.1的方法进行测定，将测得的荧光强度代入标准曲线方程中算出供试品中AMK的含量，结果见表2。

荧光光谱法测定阿米卡星含量结论

2005年版《中国药典》(二部)收载的阿米卡星的含量测定方法是微生物法，该方法不仅过程繁琐且耗时较长，所受的干扰因素也较多，往往造成测得的含量结果误差大，重现性差。运用荧光光谱法对AMK进行含量测定时，不仅操作简便，分析速度快，且该方法所受的干扰因素也少，结果更为准确可靠。本方法为建立快速测定阿米卡星的含量提供了参考。